不同種類微生物的培養(yǎng)需要使用不同的培養(yǎng)基。同時一種微生物也可以通過多種的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法進行培養(yǎng)。這樣主要介紹使用微生物檢測儀的各種不同培養(yǎng)方法。 1.濾膜法 濾膜是一種微孔性薄膜。將水樣注入已滅菌的放有濾膜(孔徑0.45μm)的抽濾裝置中,經(jīng)過抽濾,細菌會被截留在膜上,然后將濾膜貼于相應細菌的培養(yǎng)基上,進行培養(yǎng)。經(jīng)過培養(yǎng)后,濾膜上會根據(jù)不同的培養(yǎng)基,出現(xiàn)各種不同的菌落。計算濾膜上生長的菌落數(shù),可計算出每1L水中含有的各種細菌的菌群數(shù)。濾膜法具有高度的再現(xiàn)性,可用于檢驗各種水樣,能比多管發(fā)酵法更快的獲得肯定的結果。 1.1濾裝置 抽濾裝置包括電池、真空泵、斗式過 濾杯、中間砂心過濾頭(燒結濾頭)、三角集液瓶以及不銹鋼制固定夾。以無菌操作,依照右圖把裝置安裝起來。 1.2水樣過濾 用無菌鑷子(火焰滅菌器滅菌)夾取滅菌濾膜邊緣,貼在已滅菌的燒結濾頭(火焰滅菌器滅菌)上,夾好抽過濾杯。將適量的水樣注入過濾杯中,加蓋,開支真空泵,把水中的所有細菌抽濾在濾膜的表面。 1.3細菌培養(yǎng) 將濾膜移到培養(yǎng)皿里已被相應培養(yǎng)基浸潤的吸收墊上,在移動培養(yǎng)箱內進行培養(yǎng)。 1.4結果觀察與報告 計算濾膜上生長的菌群菌落個數(shù),根據(jù)過濾水樣的量,計算1L或100ml水樣中菌群數(shù)。 2.酶底物法 酶底物法為GB5750-2006收錄的用于大腸菌群及大腸埃希氏菌檢測標準方法,酶底物法是目前水中總大腸菌群及大腸埃希氏菌檢測的最先進方法。以其方便快捷,假陽性低,適用大量樣品快速檢測等優(yōu)點正逐步被國內檢測部門所認可。相對于多管發(fā)酵和濾膜法,酶底物法檢測步驟大大減少,而且對實驗環(huán)境要求不高,檢測時間可減少到24小時,在日常水樣監(jiān)測及應急監(jiān)測中具有很好的應用前景,可及時檢測,預防,最大限度的減少重大公共安全事故的發(fā)生幾率。 2.1操作步驟: 用 100 mL的無菌稀釋瓶量取 100 mL 水樣,加入一管酶底物法培養(yǎng)基粉末,混搖均勻使之完全溶解。準備 10 支10ml適當大小的滅菌試管,用無菌吸管分別從上述稀釋瓶中吸取10mL水樣至各試管中,放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。 2.2結果觀察與報告: 大腸菌群:將培養(yǎng) 24 h之后的試管取出觀察,如果試管內水樣變成黃色則表示該試管含有總大腸菌群。計算有黃色反應的試管數(shù),對照下表1查出其代表的總大腸菌群最可能數(shù)CMPN)。 結果以MPN/100 mL 表示。 如所有管未產(chǎn)生黃色,則可報告為總大腸菌群未檢出。 大腸埃希氏菌:將培養(yǎng)24h顏色變成黃色的水樣的試管,在暗處用紫外燈觀察,如果有藍色熒光產(chǎn)生則表示有大腸埃希氏菌。計算有熒光反應的試管數(shù),對照表1 查出其代表的大腸埃希氏菌最可能數(shù)MPN), 結果以MPN/100 mL 表示。 如所有管未產(chǎn)生藍色熒光,則可報告為大腸埃希氏菌未檢出。
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